よくあるご質問（FAQ） » 細胞培養試薬

#00717ロンザの骨芽細胞(NHOst)のおおよその倍加時間を教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:56 +0000

弊社の骨芽細胞(NHOst) の平均倍加時間は初期の継代で35-40時間です。より長く継代培養した場合、形態が変わる可能性があります。

#00707ロンザの大動脈平滑筋細胞(AoSMC)はどこから単離されていますか?

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:56 +0000

弊社の大動脈平滑筋細胞(AoSMC)は上行大動脈もしくは下行大動脈から単離されています。多くが上行大動脈由来です。大動脈は全身への血液循環の動脈であり、AoSMCは上行大動脈もしくは大動脈弓から単離されています。極めて低い確率ですが、下行大動脈が単離される場合があります。

#00706冠状動脈平滑筋細胞(CASMC)はどの程度のサイズですか?

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:56 +0000

弊社のR&Dチームは懸濁液中で直径で約30μmであることを推測しています。

#00705ロンザの骨格筋筋芽細胞(HSMM)は分化(デスミン生成)するまでに、どのくらいかかりますか?また、同様に骨格筋細胞(SkMC)の場合についても教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:56 +0000

通常、50-70%コンフエンスに達した場合に筋芽細胞は多核筋管を形成します。筋管は多数の筋芽細胞の結合により形成されています。だいたい51%コンフルエンスに到達した時に分化培地を加えると、筋管の成長を促進します。培養方法についてはそれぞれのプロトコルを参照し、すすめてください。なお、HSMMとSkMCを比較すると、分化速度はSkMCが遅い傾向があります。

#00704ロンザの骨格筋細胞(HSMM)の由来を教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:56 +0000

弊社の骨格筋筋芽細胞(HSMM)は、乳幼児等を含む成人由来（胎児ではない）のドナーから採取しており、大腿四頭筋あるいは腰筋から単離しています。

#00703ロンザの骨格筋筋芽細胞(SkMC)用推奨培地のSkGMTM BulletkitTM と骨格筋細胞(HSMM)用推奨培地のSkGMTM-2 BuletkitTMの違いを教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:56 +0000

SkGM BulletitTMはSkMCの増殖するよう最適化されており、もともと本製品のみが販売されていました。その後、HSMM細胞の提供を始め、その際にHSMMの増殖用BulletkitシステムとしてSkGM-2の提供するようになりました。それぞれの組成は以下ですが、SkMC細胞⇔SkBM , HSMM細胞⇔SKBM-2、　での組み合わせにおいて確認試験をおこなっておらず、組み合わせを変えた場合の増殖能への影響は分かりかねます。極力、それぞれ推奨培地をご使用ください。
[培地]
SkBM：無血清、
SkBM-2：無血清、L-グルタミン含まず
[添加因子]
SkGM：hEGF, インシュリン、フェチュイン、デキサメタゾン、GA-1000、BSA
SkGM-2：rhEGF、デキサメタゾン、L-グルタミン、GA-1000、FBS

#00701ロンザの骨格筋細胞(SkMC)の単離部位を教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:56 +0000

弊社の骨格筋細胞(SkMC)の由来は、胎児の上腕、大腿部横紋筋、または大腿四頭筋から単離しています。

#00700ロンザの骨格筋細胞(SkMC)と骨格筋筋芽細胞(HSMM)との大きな違いを教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:56 +0000

弊社の骨格筋細胞(SkMC)は胎児組織由来、一方骨格筋筋芽細胞(HMSS)は乳幼児を含む成人由来（1～40才まで）の製品となっております。また相違点としては、骨格筋筋芽細胞(HSMM)のほうが骨格筋細胞(SkMC)よりも分化後のデスミン陽性率が高い傾向があります。

#00727CC-4519: 5プロモ-2′-デオキシウリジンをラット心筋細胞に用いる目的を教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:56 +0000

BrｄUは線維芽細胞の増殖を抑制するのに有効です。BrｄUを添加しない場合は、増殖が促進されますので、ご注意ください。

#00828FBMTM基礎培地とSCBMTM基礎培地の相違を教えてください。FBMTM基礎培地とSCBMTM基礎培地は置換えて使用することは可能でしょうか?またFBMTM基礎培地のフェノールレッドフリー培地はありますか?

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:57 +0000

FBMTM基礎培地とSCBMTM基礎培地では基本的に同じ成分で構成されていますが、フェノールレッドの含有/不含が異なります。FBM：フェノールレット含む、SCBM：フェノールレッド不含. このためFBMTM基礎培地とSCBMTM基礎培地は必要に応じて置換え可能です。フェノールレット不含のFBMが必要な場合はSCBMに置換え可能です。

#00777ロンザの破骨前駆細胞（ＯＣＰ）は継代可能でしょうか。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:57 +0000

破骨前駆細胞(OCP)をトリプシン処理を行うのは大変難しい操作であるため、弊社では継代によるダメージがあった場合保証はできませんが、もしトリプシンによる継代操作を行われるという場合には、0.05%トリプシン/EDTAを用られることをお奨めしています。

#00767ロンザの肺微小血管細胞の形態は他の内皮細胞となぜ異なるのですか?

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:57 +0000

多くの内皮細胞は「敷石」型(“paving stone”)を形態しますが、弊社の肺微小血管内皮細胞 (HMVEC-L)は、より細長く伸張した形態を示しますが、これは低いコンフルエンス培養条件下においては正常な形態です。

#00766ロンザの肺微小血管細胞(HMVEC-L)の由来を教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:57 +0000

弊社の肺微小血管細胞(HMVEC-L)は肺の外層直下の組織から単離されていますが、目視での血管の確認は難しいです。

#00756ロンザの複数ドナー製品では、ドナーの人数はどのくらいでしょうか?

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:57 +0000

弊社の細胞製品では少なくとも3人以上にて「複数ドナー」と設定しています。多ければ、6人にて複数ドナーを構成することがありますが、ほとんどの製品では3人にて製品をご提供しています。

#00738EGMTMとEGM-2TM増殖培地の相違点を教えてください。また、EGMTM-MVとEGMTM-2MV増殖培地の相違点も教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:57 +0000

EBMTMとEBM-2TM基礎培地は基本的に同一成分を含んでおり、主な違いは添加因子です。EGMTMとEGMTM-MVはウシ脳抽出物を成長因子として含んでいます。EGMTM-2とEGMTM-2MV増殖因子にはBBEを含んでおらず、そのかわり線維芽細胞増殖因子(FGF), 血管内皮増殖因子(VEGF), インシュリン様成長因子(R3-IGF-1)、上皮成長因子(hEGF)を含んでいます。細胞の増殖はEGMTM-2とEGMTM-2MVにおいてより良好な結果が期待できます。ただ、お客様によってはEGMTMとEGMTM-MV増殖培地はVEGF,FGFや血管新生の研究に対して良好な結果が得られるとともに、ウシ由来内皮細胞に対しても高いパフォーマンスが得られるとフィードバックいただいています。

#00737EBMTMとEBM-2TMの相違点を教えてください。EBMTM-2基礎培地をEBM基礎培地(フェノールレッド含む)に代替え利用することは可能でしょうか。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:56 +0000

EBMTMとEBM-2基礎培地は基本的に同一成分を含んでおり、主な違いはフェノールレッドの濃度です。フェノールレッドの含有量はEBM-2TM培地はEBMTM培地の約1/10となっています。もし、フェノールレッドフリー培地の使用をご希望の場合、EBMTMとEBM-2TMをEBMフェノールレッドフリー培地に置換えることは可能です。

#00728ロンザのラット心筋細胞の培養時に（線維芽細胞の増殖を抑制する）5-BrdUの代わりとなるその他の方法はありますか?

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:56 +0000

まずはじめにBrdUをお使いいただくことをお勧めします。この製品を開発する際にロンザはcytosine arabino furanoside (CAF)を用いて増殖抑制を確認し、さらに筋細胞でも同様に抑制することを確認しており、残念ながらマイトマイシンン使用して線維芽細胞の増殖抑制を確認しておりません。

#00861ロンザの皮膚細胞の単離部位を教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:57 +0000

弊社の成人皮膚細胞(ケラチノサイト、微小血管細胞、線維芽細胞、メラノサイト)は美容形成手術によって得られた皮膚組織から単離された製品です。多くの成人皮膚細胞は腹部脂肪除去手術により得られておりますが、一部他の入手経路として乳房形成、太ももや上腕の脂肪除去手術などからも得られています。また非常に稀ではありますが死体から皮膚を採取するケースもあります。また、新生児皮膚細胞（ケラチノサイト、微小血管細胞、線維芽細胞、メラノサイト）は新生児の割礼の際にえられた包皮組織から単離されています。

#01061他の3次元培養とRAFT™ 3D Cell Culture System の違いを教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:59 +0000

一般的なゲルは4-20mg/ml のコラーゲン濃度であるのに対し、RAFTTMでは生体内環境により近いコラーゲン濃度(80mg/ml)になります。コラーゲンを濃縮することにより、従来のコラーゲン濃度では見られなかった細胞相互作用や３次元での長期培養維持（iPS細胞由来の肝細胞では40日の培養が可能）を可能にします。RAFTTMで作られる100-120μmの厚さのゲルはピンセットで簡単に取り出せるので、種々のアッセイが容易に行え、ハイスループットのシステムにも応用可能です。また、RAFTTMシステムは、吸収剤単独でも購入できますので、コラーゲン以外の細胞間マトリックスや複数種のマトリックスを組み合わせて使用することも可能です（条件の検討は必要）。カルチャーインサートでの使用や複数の細胞種での共培養も様々なフォーマットで行う事が可能であり、多様な三次元培養モデルに対応する事が可能です。

#01019共培養を実行する手順を教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:58 +0000

以下の方法にて共培養を行うことができます。
1. 2種類の細胞を混合しRAFTTMに埋め込む場合：2種類の細胞を一緒に培地と混和します。細胞比率を調整することも可能です。
2. 2層のマトリックスで異なる細胞種を積層する場合：まずはじめに１つめの細胞をRAFTTMコラーゲンと混和し、RAFTTM培養を作製します。次にもう1種類の細胞を240μL (96-well プレートの場合)のコラーゲン溶液と混合し、先程作製した最初の層の上にRAFTTMを完成させます。濃縮過程を経た後、細胞種に適する培地を加えて培養すると3次元モデルが出来上がります。
3. 上皮もしくは内皮細胞はコラーゲンの上層部に作成し、別の細胞種はコラーゲンの中に埋め込むモデルの場合：一方の細胞をコラーゲンに埋め込みRAFTTM作製のステップが終了したら、内皮もしくは上皮細胞をマトリックスの上層部に分注して培養します。