よくあるご質問（FAQ） » タンパク質発現

#01058RAFT™ 3D Cell Culture System で培養した場合と平面培養時の蛍光免疫染色でのプロトコルの違いを教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:59 +0000

蛍光免疫法による標識は平面培養でもRAFT™ 3D Cell Culture System においても一般的にプロトコルに違いはありません。スフェロイドの状態の細胞を染色する際には、内部にある標的タンパク質に抗体を反応させるため、透過処理が必要となります。具体的なプロトコルは弊社のテクニカルノートを参照ください。

#00344浮遊細胞であるHEK293（およびCHO）細胞は、培養中で凝集する傾向があります。回避可能な方法がありましたら教えてください。

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:53 +0000

効率的なタンパク質産生のためには、宿主細胞を単一の状態で懸濁培養する条件が必須です。しかしながら接着能を有する宿主細胞も多いことから難しいケースもあります。ロンザはタンパク発現用に最適化された培地を提供しています。浮遊状態で増殖させるロンザの市販培地を使用することで、より早い増殖を可能にします。
更に、泡だたないように十分懸濁（オービタルシェーカー；110～150 rpm ）することも必要です。また、継代手順で均一性の高い単一細胞懸濁液を得るために、継代時に細胞の凝集隗を除去するために、100ミクロンの細胞ストレーナー(BD Falcon™)を使用することをお勧めします。細胞の継代スケジュールを定期的かつ頻繁に実施することで、推奨密度で細胞を維持培養するようにしてください。

#00234遺伝子導入した肝細胞を生体へ移植したデータはありますか? また、タンパク発現はどのくらい継続しますか?

ロンザジャパン — Wed, 14 Sep 2016 06:00:53 +0000

マウス肝細胞への遺伝子導入後、再移植しタンパク発現を確認した報告がChen らにより報告されています。この論文では、数日の間、タンパク発現が確認されたという報告が記載されています: Plasmid-electroporated primary hepatocytes acquire quasi-physiological secretion of human insulin and restore euglycemia in diabetic mice Authors: Chen NK, Sivalingam J, Tan SY and Kon OL In: Gene Ther (2005) 12(8): 655-667