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弊社製品使用上の注意点

遺伝子導入 -Nucleofector™-

Nucleofector™における遺伝子導入最適化ストラテジー

ロンザでは150種類以上の細胞タイプにおける最適化された電気プログラムを含む遺伝子導入プロトコルをご用意しています。加えて、1500種類以上の細胞タイプにおけるデータが「導入実績データベース」にて閲覧可能です。もし導入したい細胞のプロトコルのご用意がロンザない場合でも、簡単に目的細胞の最適化プログラムを調べることができます。下記のフローチャートに沿って、目的の細胞における最適化プロトコルや実績が存在するかどうかをご確認下さい。

4D-Nucleofector™における細胞調製方法や手順については、こちらをご覧下さい。 4D-Nucleofector™簡易マニュアル

【Case 1】細胞株 最適化プロトコルなし 「導入実績データベース」におけるデータなし Cell Line Optimization

導入したい細胞のプロトコルや実績データのご用意がロンザない場合でも、以下のプログラム最適化の流れに則って、ご自身の遺伝子導入実験にベストのNucleofector™プログラムを探し出してみて下さい。

STEP1:Full Optimization

導入したい細胞のプロトコルや実績データのご用意がロンザない場合でも、以下のプログラム最適化の流れに則って、ご自身の遺伝子導入実験にベストのNucleofector™プログラムを探し出してみて下さい。最適化を実施する際の導入基質は必ず各キット内容品のpmaxGFPベクターをご利用下さい。

Cell Line Full Optimizationに使用するキットおよびプログラム数

  4D-Nucleofector™
X Unit
4D-Nucleofector™
Y Unit
96-well Shuttle™ Device Nucleofector™ I/II/2b Device
Nucleofector™
Kit
Cell Line Optimization
4D-Nucleofector™ X Kit
[V4XC-9064]
Primary Cell Optimization
4D-Nucleofector™ Y Kit
[V4YP-9A48]
Cell Line Optimization
96-well Nucleofector™ Kit
[V4SC-9096]
Cell Line Optimization
Nucleofector™ Kit
[VCO-1001N]
最適化プログラム数 16プログラム x 3種試薬 12プログラム x 2種試薬 32プログラム x 3種試薬 7プログラム x 2種試薬

プロトコル リスト Cell Line Full Optimization

  4D-Nucleofector™
X Unit
4D-Nucleofector™
Y Unit
96-well Shuttle™ Device Nucleofector™ I/II/2b Device
Cell Line Optimization 4DX Cell Line Optimization
(SE SF SG)
4DY Optimization (AD1 AD2) 96-well Shuttle™ Cell Line Optimization (SE SF SG) Amaxa™ Cell Line Optimization

STEP2:Fine Tuning (4D-Nucleofector™ X Unitおよび96-well Shuttle™ Deviceのみ対応)

STEP1のFull Optimizationで15種類のプログラムを実施後、遺伝子導入効率および細胞生存率が良好なプログラムを選定し、下記表を基にSTEP2 Fine Tuningを実行して、ベストなプログラムを探して頂くことをお奨めします。Fine Tuningでは、最適化プログラム15種をベースとして、導入効率を向上させるためのプログラム4種および細胞生存率を向上させるためのプログラム4種をご用意しています。

【Case 2】初代細胞 最適化プロトコルなし 「導入実績データベース」におけるデータなし Primary Cell group-specific Optimization

初代細胞における最適化では、試薬とプログラムがある程度まで絞り込まれ、さらに簡単に目的細胞の最適プログラムを調べることができます。最適化を実施する際の導入基質は必ず各キット内容品のpmaxGFPベクターをご利用下さい。

Primary Cell group-specific Optimizationに使用するキットおよびプログラム数

  4D-Nucleofector™
X Unit
4D-Nucleofector™
Y Unit
96-well Shuttle™ Device Nucleofector™ I/II/2b Device
Endothelial cells (mammalian) P5 X Kit S [V4XP-5032]
8プログラム
AD1 4D-Nucleofector™ Y Kit [V4PY-1A24]
8プログラム
P5 X Kit [V4SP-5096]
8プログラム
Basic Nucleofector™ Kit for Endothelial Cells [VPI-1001]
プログラム
Epithelial cells (mammalian) P1 X Kit S [V4XP-1032]
P3 X Kit S [V4XP-3032]
8プログラム x 2種試薬
下記 Full Optimizationを参照 P1 X Kit [V4SP-1096]
P3 X Kit [V4SP-3096]
8プログラム x 2種試薬
Basic Nucleofector™ Kit for Epithelial Cells [VPI-1005]
6プログラム
Fibroblasts (mammalian) P2 X Kit S [V4XP-2032]
P3 X Kit S [V4XP-3032]
8プログラム x 2種試薬
下記 Full Optimizationを参照 P2 X Kit [V4SP-2096]
P3 X Kit [V4SP-3096]
8プログラム x 2種試薬
Basic Nucleofector™ Kit for Fibroblasts [VPI-1002]
6プログラム
Glial cells (mammalian) P3 X Kit S [V4XP-3032]
8プログラム
下記 Full Optimizationを参照 P3 X Kit [V4SP-3096]
8プログラム
Basic Nucleofector™ Kit for Glial Cells [VPI-1006]
6プログラム
Neurons (mammalian) P3 X Kit S [V4XP-3032]
8プログラム
AD1 4D-Nucleofector™ Y Kit [V4PY-1A24]
8プログラム
P3 X Kit [V4SP-3096]
8プログラム
Basic Nucleofector™ Kit for Neurons [VPI-1003]
6プログラム
Smooth muscle cells (mammalian) P1 X Kit S [V4XP-1032]
7プログラム
下記 Full Optimizationを参照 P1 X Kit [V4SP-1096]
7プログラム
Basic Nucleofector™ Kit for Smooth Muscle Cells [VPI-1004]
6プログラム
Stem cells (human) P3 X Kit S [V4XP-3032]
P4 X Kit S [V4XP-4032]
8プログラム x 2種試薬
下記 Full Optimizationを参照 P3 X Kit [V4SP-3096]
P4 X Kit [V4SP-4096]
8プログラム x 2種試薬
Human Stem Cell Nucleofector™ Starter Kit [VPH-5002]
6プログラム x 2種試薬

プロトコル リスト Primary Cell group-specific Optimization

  4D-Nucleofector™
X Unit
4D-Nucleofector™
Y Unit
96-well Shuttle™ Device Nucleofector™ I/II/2b Device
Endothelial cells (mammalian) 4DX Basic Endothelial cells
(P5 Solution)
4DY Basic Endothelial cells
(AD1 Solution)
96-well ShuttleTM Basic Endothelial cells (P5 Solution) Amaxa™ Basic Endothelial
Epithelial cells (mammalian) 4DX Basic Epithelial cells
(P1 P3 Solution)
下記 Full Optimizationを参照 96-well ShuttleTM Basic Epithelial cells (P1 P3 Solution) Amaxa™ Basic Epithelial
Fibroblasts (mammalian) 4DX Basic Fibroblasts
(P2 P3 Solution)
下記 Full Optimizationを参照 96-well ShuttleTM Basic Fibroblasts (P2 P3 Solution) Amaxa™ Basic Fibroblasts
Glial cells (mammalian) 4DX Basic Neurons
(P3 Solution)
下記 Full Optimizationを参照 96-well ShuttleTM Basic Neurons (P3 Solution) Amaxa™ Basic Glial
Neurons (mammalian) 4DX Basic Neurons
(P3 Solution)
4DY Basic Neurons
(AD1 Solution)
96-well ShuttleTM Basic Neurons (P3 Solution) Amaxa™ Basic Neurons
Smooth muscle cells (mammalian) 4DX Basic Smooth Muscle cells (P1 Solution) 下記 Full Optimizationを参照 96-well ShuttleTM Basic Smooth Muscle cells (P1 Solution) Amaxa™ Basic Smooth Muscle 
Stem cells (human) 4DX Basic Human Stem cells (P3 P4 Solution) 下記 Full Optimizationを参照 96-well ShuttleTM Basic Human Stem cells (P3 P4 Solution) Amaxa™ Human Stem cell

Primary Cell group-specific Optimization以外の初代細胞タイプの最適化を実施する際は、下記のようにFull Optimizationを実施するようにして下さい。最適化を実施する際の導入基質は必ず各キット内容品のpmaxGFPベクターをご利用下さい。

Primary Cell Full Optimizationに使用するキットおよびプログラム数

  4D-Nucleofector™
X Unit
4D-Nucleofector™
Y Unit
96-well Shuttle™ Device Nucleofector™ I/II/2b Device
Nucleofector™ Kit Primary Cell Optimization
4D-Nucleofector™ X Kit
[V4XP-9096]
Primary Cell Optimization
4D-Nucleofector™ X Kit
[V4YP-9A48]
Primary Cell Optimization
96-well Nucleofector™ Kit
[V4SP-9096]
お問合せ下さい
最適化プログラム数 16プログラム x 5種試薬 12プログラム x 2種試薬 32プログラム x 5種試薬

プロトコル リスト Primary Cell Full Optimization

  4D-Nucleofector™
X Unit
4D-Nucleofector™
Y Unit
96-well Shuttle™ Device Nucleofector™ I/II/2b Device
Primary Cell Optimization 4DX Primary cell Optimization (P1 P2 P3 P4 P5) 4DY Optimization (AD1 AD2) お問合せ下さい お問合せ下さい

【Case 3】 最適化プロトコルなし 「導入実績データベース」におけるデータあり

「導入実績データベース」には、細胞タイプ毎にユーザー情報を基にした遺伝子導入実績が記載されています。最適化プロトコルがない場合は、Optimizationを実施頂くことが望ましいのですが、ユーザーデータを基に導入実験を行って頂く事も可能です。ユーザーデータを踏襲する際には、遺伝子導入成功の可能性を広げるために周辺プログラムの同時評価もお奨めしています。詳しくはテクニカルサポートまでお問合せ下さい。

4D-Nucleofector™における細胞調製方法や手順については、こちらをご覧下さい。 4D-Nucleofector™簡易マニュアル

例1)Caco-2細胞の場合

Nucleofector™ 2bの最適化プロトコルはご用意がありますが、4D-Nucleofector™ X Unitにはご用意がありません。

例2)MCF10A細胞の場合

Nucleofector™ 2bおよび4D-Nucleofector™ X Unitにおける最適化プロトコルのご用意はありません。